圆弧青霉脂肪酶基因的克隆和表达

Cloning and Expression of the Gene Encoding Alkaline Lipase from Penicillium cyclopium

DOI：

中文关键词: 圆弧青霉PG37,碱性脂肪酶,克隆,表达

英文关键词: Penicillium cyclopium PG37,alkaline lipase,cloning,expression

基金项目:国家“九五”科技攻关项目 (96 C0 3 0 2 0 1)资助课题

邬敏辰 朱吉 黄伟达 孙崇荣

江南大学医学系 江苏无锡214063

(邬敏辰，朱吉)

，复旦大学生命科学学院 上海200433

(黄伟达)

，复旦大学生命科学学院 上海200433(孙崇荣)

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中文摘要:

圆弧青霉PG37总RNA甲醛变性电泳呈现真核生物所特有的 2 8SrRNA和 18SrRNA条带 .根据PG37所产碱性脂肪酶 (LipPC)N末端氨基酸残基序列和真核生物mRNA在 3’端具有poly(A)等所提供的生物信息 ,采用RT PCR技术扩增了LipPC成熟肽和 3’非编码区的cDNA片段 ,并将该PCR产物直接克隆至pUCm T载体中 .序列分析表明 ,LipPC含有 2 5 8个氨基酸残基 ,其中保守的五肽序列为Gly His Ser Leu Gly .进一步采用ClonTech公司的SmartTM PCRcDNA文库构建试剂盒 ,扩增、克隆和测定了自转录起始点至编码区的cDNA片段 ,从而完成了LipPC完整cDNA的分析测定 .最后将编码完整脂肪酶蛋白质的cDNA克隆至 pGEX 5X 3表达载体中 ,SDS PAGE检测结果表明 ,大肠杆菌BL2 1所表达的GST LipPC融合蛋白质分子质量约为 5 3ku .

英文摘要:

Total RNA was isolated from Penicillium cyclopium PG37 with TRIzol reagent by one step method, in which the 28S and 18S rRNA bands of fungi were characterized on formaldehyde denatured electrophoresis. With the information of N terminal amino acid s

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