关惠琴(江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214036)
李寅(江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214036;江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214036)
何宁(江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214036)
堵国成(江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214036)
陈坚(江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214036;江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214036)
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谷氨酸棒杆菌CCTCC M201005能合成一种以半乳糖醛酸为主要结构单元的蛋白聚糖类生物絮凝剂(命名为REA-11).为了研究该聚合物的生物合成途径,首先构建了谷氨酸棒杆菌生物合成REA-11的假设途径,然后从(1)中间代谢产物的添加及相关途径关键酶活性的检测和(2)胞内中间代谢产物的检测两个方面来验证该代谢途径的合理性.研究表明,在培养基中添加代谢途径的中间产物UDP-葡萄糖,可显著提高REA-11的絮凝活性,并且UDP-半乳糖差向酶和UDP-半乳糖脱氢酶的比酶活也分别提高了200%和50%;以不同底物为碳源,UDP-葡萄糖焦磷酸化酶、UDP-半乳糖差向酶和UDP-半乳糖脱氢酶的比酶活与REA-11产量的相关系数可分别达到0.75,0.89,0.97. 此外,利用HPLC检测出REA-11合成途径中3种关键中间产物UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖和UDP-葡萄糖醛酸.由此证明,所构建的REA-11生物合成途径基本合理.
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