蛇毒类凝血酶基因在大肠杆菌中的融合表达及纯化

Fusion Expression and Purification of Gloshedobin, a Thrombin-Like Enzyme from Gloydius Shedaoensis in E. coli

DOI：

中文关键词: 类凝血酶,固定化金属亲和层析,融合表达,大肠杆菌

英文关键词: thrombin-like enzyme,immobilized metal affinity chromatography,fusion expression,E. coli

基金项目:辽宁省科技基金项目(No.99305001)资助课题.

李民 杨青 包永明 雷旭宇 许建强 安利佳

大连理工大学生物工程系，大连理工大学生物工程系，大连理工大学生物工程系，大连理工大学生物工程系，大连理工大学生物工程系，大连理工大学生物工程系 辽宁 大连 116024，辽宁 大连 116024，辽宁 大连 116024，辽宁 大连 116024，辽宁 大连 116024，辽宁 大连 116024

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中文摘要:

将大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶(Gloshedobin)基因克隆到载体pET32-a(+)上,在T7lac启动子下以N端融合硫氧还蛋白的形式在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,诱导条件为:30℃诱导6 h,IPTG浓度为1 mmol/L.利用固定化金属离子(Ni2+)亲和层析分别对胞内可溶物和变性条件下的包涵体进行纯化.通过SDS-PAGE检测融合蛋白的纯度,采用点杂交和纤维蛋白凝结活性检测分析,显示纯化产物具有较高生物活性.

英文摘要:

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