酒用酸性脲酶的纯化及其N端序列的测定

Purification and N-terminal Analysis of An Acid Urease

DOI：

中文关键词: 酸性脲酶 尿素 肠杆菌属细菌 纯化 N端序列

英文关键词:

基金项目:国家"十一五"科技支撑计划项目

杨鲁强 王松华 田亚平 徐岩 赵光鳌

江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122

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中文摘要:

采用乙醇分级沉淀、Superdex200凝胶过滤、Mono Q离子交换对Enterobactria sp R-SYB082产酒用酸性脲酶进行了纯化.SDS-PAGE电泳结果表明,该酶已达到电泳纯,纯化倍数为21.1,酶活回收42%.Superdex200凝胶过滤测定其全酶相对分子质量约为430 000,SDS-PAGE电泳测定其亚基相对分子质量约为72 000,表明该酶为同源六聚体,并利用Edman降解法测定了蛋白质N端序列的8个氨基酸残基序列:S-F-K-M-D-R-K-Q.酶反应的最适pH为4.5,最适温度为35℃.以尿素为底物时,该酶表现Km及Vmax分别为19.5μmol/L和0.87μmol/min.Na 、Mn2 对酶活有一定的激活作用,Ca2 、Zn2 对酶活有一定的抑制作用,酒石酸、琥珀酸对酶活有一定的激活作用,草酸、乙酸对酶活有一定的抑制作用.

英文摘要:

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