| 提高耦合系统ATP再生效率促进谷胱甘肽合成的研究
| Enhancement of Glutathione Synthesis by Improving ATP-Regenerating Efficiency in the Coupled System
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| DOI：
| 中文关键词: 谷胱甘肽 生物合成 耦合系统 大肠杆菌 酿酒酵母
| 英文关键词: glutathione biosynthesis coupled system Escherichia coli Saccharomyces cerevisiae
| 基金项目:国家863计划项目(2006AA10Z313);国家自然科学基金项目(30800008);江苏省自然科学基金项目(BK2008096)
| 作者
| 单位
| 林军
| 江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214122
江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214122
| 廖鲜艳
| 江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214122
江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214122
| 堵国成
| 江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214122
江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214122
| 陈坚
| 江南大学,生物工程学院,江苏,无锡,214122
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| 中文摘要:
| 利用重组Escherichia coliΔadd/ade(pBV03)和Saccharomyces cerevisiaeWSH2构建了一个生物合成谷胱甘肽(GSH)的种间耦合系统。在该耦合系统中,一方面,大肠杆菌腺苷脱氨酶和腺嘌呤脱氨酶的缺失完全切断了E.coliΔadd/ade(pBV03)中不可逆转化腺苷(Ado)生成次黄嘌呤(Hx)的途径;另一方面,利用脯氨酸限制性培养降低了酿酒酵母WSH2中ADE的活性,进一步降低了耦合系统中从Ado到Hx的不可逆转化。以上两方面大大降低了耦合系统中从Ado到Hx的不可逆转化,从而保证更多的底物Ado被S.cerevisiaeWSH2用于再生ATP,最终耦合系统中ATP再生的效率大大提高。反应6 h后,该耦合系统GSH的合成量达到13.68mmol/L,为对照的5.14倍。
| 英文摘要:
| A coupled system used for the biosynthesis of glutathione(GSH) was constructed with Escherichia coli Δadd/ade(pBV03) and Saccharomyces cerevisiae WSH2.On one hand,the irreversible transformation from adenosine(Ado) to hypoxathine(Hx) in E.coli Δadd/ade(pBV03) was completely blocked by the disruption of adenosine deaminase(ADA) and adenine deaminase(ADE).On the other hand,the activity of ADE in S.cerevisiae WSH2 decreased greatly when it was cultured in proline minimal medium.Therefore,the transformation from Ado into Hx decreased significantly,and more Ado was used to regenerate ATP by S.cerevisiae WSH2.At last,ATP-regenerating efficiency was improved,and GSH production reached 13.68 mmol/L,which was 5.14 fold of the control.
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