| 牛凝乳酶全长cDNA的克隆及其原核表达载体的构建
| Cloning and Prokaryotic Expression Vector Construction of Bovine Chymosin
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| DOI：
| 中文关键词: 凝乳酶 克隆 原核表达载体 构建
| 英文关键词: chymosin cloning prokaryotic expression vector construction
| 基金项目:国家863计划项目(2006AA10Z306);吉林省科技厅重点项目(20060219、20080228);现代农业产业体系专项资金项目
| 作者
| 单位
| 张莉
| 吉林省农业科学院,农产品加工研究中心,吉林,长春,130033
| 姜媛媛
| 吉林省农业科学院,农产品加工研究中心,吉林,长春,130033
| 张健
| 吉林省农业科学院,农产品加工研究中心,吉林,长春,130033
| 杨贞耐
| 吉林省农业科学院,农产品加工研究中心,吉林,长春,130033
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| 中文摘要:
| 从小牛皱胃中提取凝乳酶（Chymosin）总RNA,经过RT-PCR获得凝乳酶cDNA,纯化后与pMD-18T载体连接,转化大肠杆菌JM109,通过双酶切和序列测定,获得了凝乳酶全长基因序列。序列测定表明,凝乳酶全长核苷酸长度为1 143 bp,编码381个氨基酸。与GenBank上已发表序列NM180994进行比较,核苷酸同源性为99.56%。将该基因片段克隆到原核表达载体pET-22b中,构建重组质粒pET-22b/Chymosin,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确,为凝乳酶的进一步表达奠定了基础。
| 英文摘要:
| In this study,the total RNA of chymosin was extracted from Absomum of calf and its cDNA was obtained by RT-PCR.The purified RT-PCR products and pMD-18T vector were ligated and transformed into host strain E.coli JM109.The full length of Chymosin gene is consist of 1 143 bp,and encodes 381 amino acids.The homology of the nucleotides with NM180994 is 99.56%.The aim gene was expression on the prokaryotic expression vector pET-22b and a recombinant plasmid pET-22b/Chymosin was constructed successfully.
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