| 三聚氰胺脱氨酶基因克隆表达及活性测定
| Cloning,Expression and Characterization of Recombinant Melamine Deaminase in E.coli
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| DOI：
| 中文关键词: 三聚氰胺 脱氨酶 大肠杆菌 重组蛋白
| 英文关键词: melamine deaminase Escherichia coli recombinant protein
| 基金项目:国家863计划项目(2007AA10Z427)
| 作者
| 单位
| 涂追
| 食品科学与技术国家重点实验室,南昌大学,江西,南昌,330047
南昌大学,中德联合研究院,江西,南昌,330047
| 许杨
| 食品科学与技术国家重点实验室,南昌大学,江西,南昌,330047
南昌大学,中德联合研究院,江西,南昌,330047
| 季艳伟
| 食品科学与技术国家重点实验室,南昌大学,江西,南昌,330047
南昌大学,中德联合研究院,江西,南昌,330047
| 陶勇
| 南昌大学,中德联合研究院,江西,南昌,330047
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| 中文摘要:
| 从载体pUC57-MDA中获得经过大肠杆菌密码子偏好性优化的三聚氰胺脱氨酶编码基因,将该基因连接至表达载体6HisT-pRSET中,构建了重组表达质粒6HisT-pRSET-MDA,将其转化大肠杆菌BL21(DE3),得到重组工程菌BL-MDA并进行诱导表达,利用SDS-PAGE对表达产物进行分析并测定酶活性。SDS-PAGE电泳分析结果显示,表达上清液在53 000处有明显的蛋白质条带,与理论相对分子质量的吻合,其脱氨酶活性达5.61 U。
| 英文摘要:
| The melamine deaminase gene MDA with optimized codon usage was obtained from vector pUC57-MDA,and subcloned into the expression vector 6HisT-pRSET generating recombinant expression vector 6HisT-pRSET-MDA.The recombinant strain BL-MDA was generated after 6HisT-pRSET-MDA was transformed into E.coli BL21(DE3).Expression of BL-MDA was analyzed by SDS-PAGE and the activity of recombinant enzyme was determined by indophenol blue spectrophotometric method.
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