γ-CGTase突变体制备及其产γ-CD条件优化

Preparation of γ-CGTase Mutant and Optimization of the Production of γ-CD

DOI:10.3969/j.issn.1673-1689.2018.10.002

中文关键词: CGTase γ-CD 定点突变 产物专一性

英文关键词: Keyword: CGTase,γ-CD,site-directed mutagenesis,product specificity

基金项目:

作者

单位

王金鹏

食品科学与技术国家重点实验室江南大学江苏 无锡 214122

江南大学 食品学院江苏 无锡 214122

食品安全与营养协同创新中心江南大学江苏 无锡 214122

王萍

食品科学与技术国家重点实验室江南大学江苏 无锡 214122

江南大学 食品学院江苏 无锡 214122

食品安全与营养协同创新中心江南大学江苏 无锡 214122

苑征

食品科学与技术国家重点实验室江南大学江苏 无锡 214122

江南大学 食品学院江苏 无锡 214122

食品安全与营养协同创新中心江南大学江苏 无锡 214122

李林林

食品科学与技术国家重点实验室江南大学江苏 无锡 214122

江南大学 食品学院江苏 无锡 214122

食品安全与营养协同创新中心江南大学江苏 无锡 214122

范浩然

食品科学与技术国家重点实验室江南大学江苏 无锡 214122

江南大学 食品学院江苏 无锡 214122

食品安全与营养协同创新中心江南大学江苏 无锡 214122

金征宇

食品科学与技术国家重点实验室江南大学江苏 无锡 214122

江南大学 食品学院江苏 无锡 214122

食品安全与营养协同创新中心江南大学江苏 无锡 214122

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中文摘要:

采用定点突变法将来自Bacillussp.G-825-6的γ-CGTase的211位的酪氨酸突变为亮氨酸,并利用突变体Y211L催化淀粉制备γ-CD,分别研究了底物种类、底物质量分数、反应时间、反应温度、加酶量对γ-CD产率的影响,并在单因素的基础上进行了正交优化,优化后的反应条件为:木薯淀粉质量分数为6%,加酶量为4 U/g,反应温度50 ℃,反应时间为24 h,在此条件下催化产生γ-CD的产率可达到14%,以总环糊精质量分数为100%计,催化产γ-CD的比率为97%。

英文摘要:

In this thesis,tyrosine 211 of γ-CGTase from Bacillus sp. G-825-6 changed into leucine based on site-directed mutagenesis. The influences of substrate type,concentration,time,temperature,and enzyme concentration on the mutant Y211L catalyticed starch to produced γ-CD were evaluated. On the basis of single of factor experiments,orthogonal design method was used to optimize the condition for production of γ-CD. As a result,the best condition was:cassava starch 6%,enzyme concentration 4 u/g,temperature 50 ℃,time 24 h. Under thses conditions,the production of γ-CD can reach 14%. If the total cyclodextrin content is 100%,the catalytic production ratio of γ-CD is 97%.

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